牛轉(zhuǎn)鐵蛋白為無血清培養(yǎng)基必需添加物組分,通過與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin Receptor, TfR) 相互作用,在無血清細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)揮重要功能。
轉(zhuǎn)鐵蛋白能與三價鐵離子可逆性結(jié)合,調(diào)節(jié)鐵離子轉(zhuǎn)運及代謝,維持細(xì)胞內(nèi)的鐵平衡。
我們對轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)鐵作用都很了解,但其實它重要的意義在于維持細(xì)胞的生長和增殖,也就是說它有類似于生長因子的功能。
而且,轉(zhuǎn)鐵蛋白也是一種重要的胞外抗氧化劑,可以避免細(xì)胞外環(huán)境中自由基的產(chǎn)生,防止細(xì)胞受到傷害。
牛轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿中主要的鐵傳遞蛋白,為細(xì)胞內(nèi)化和細(xì)胞代謝提供所需的鐵。研究發(fā)現(xiàn)所有的細(xì)胞生長都離不開轉(zhuǎn)鐵蛋白。
不但維持正常的細(xì)胞代謝依賴于以生物活性形態(tài)存在的鐵,鐵還是一些酶的輔助因子,比如RNA聚合酶,DNA合成酶。同時也是血紅蛋白的重要組成部分。
轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿糖蛋白,從血漿中分離而來,牛轉(zhuǎn)鐵蛋白以兩種分子形態(tài)存在,即分子量分別為74KD和78KD。
每個轉(zhuǎn)鐵蛋白分子通過C端和N端結(jié)構(gòu)位點可以結(jié)合兩分子鐵離子,所以轉(zhuǎn)鐵蛋白以三種形態(tài)存在:脫鐵(不結(jié)合鐵離子),飽和鐵(結(jié)合兩分子鐵離子)和部分飽和,在生理情況下,轉(zhuǎn)鐵蛋白分子僅有1/3被鐵飽和。
轉(zhuǎn)鐵蛋白對于絕大部分細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中生長是必需的,研究表明飽和鐵形態(tài)的轉(zhuǎn)鐵蛋白對于促進(jìn)細(xì)胞生長是有效的形態(tài)。對于雜交瘤,黏連細(xì)胞和懸浮細(xì)胞系,在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,應(yīng)保持培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度在0.5-100μg/ml。針對不同的細(xì)胞系,需要選擇合適的濃度。
保存溫度(Storage Temperature):
轉(zhuǎn)鐵蛋白凍干粉需要保存在冷藏狀態(tài)下,使用之前再溶解。一般用PBS或者其它合適的溶劑在室溫下將轉(zhuǎn)鐵蛋白凍干粉溶解成儲液,濃度在0.5-2.0mg/ml,然后用無菌濾膜進(jìn)行過濾,濾液可在無菌條件下2-8℃保存30天,長期保存請分裝后存放于-80℃。