RPMI全稱為RoswellParkMemorialInstitute,指的是洛斯維·帕克紀念研究所。RPMI是這個研究所研發(fā)的一類細胞培養(yǎng)基,1640是培養(yǎng)基代號。
RPMI-1640培養(yǎng)基是Moore等人于1967年在RoswellParkMemorialInstitute研制,最初針對淋巴細胞培養(yǎng)設計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等?,F(xiàn)在已經(jīng)廣泛應用于各種正常細胞和癌細胞的培養(yǎng),尤其是懸浮細胞的培養(yǎng),是使用最為廣泛的培養(yǎng)基之一。
(也可以參考使用用來養(yǎng)其他細胞,比如我養(yǎng)的巨噬細胞就是典型的貼壁細胞,可以用1640來養(yǎng)。曾經(jīng)試過用DMEM養(yǎng)這個巨噬,結(jié)果全部不貼壁,浪費了珍貴的細胞)
RPMI-1640培養(yǎng)基最初是為淋巴細胞培養(yǎng)專門設計的,其含有多類細胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或者任何生長因子,需搭配血清和無血清添加物使用。
下面讓我們一起來了解一下RPMI-1640培養(yǎng)基的配置方法吧
一、干粉培養(yǎng)基的過濾配制
1、將1升量的干粉在950ml細胞培養(yǎng)級純凈水中溶解
2、加入2克碳酸氫鈉,繼續(xù)攪拌至溶解
3、用1N鹽酸或1N氫氧化鈉調(diào)整到要求的pH,并將溶液體積調(diào)至1000ml
4、在超凈臺內(nèi)用0.22um濾膜負壓過濾
5、將培養(yǎng)基在2~8℃避光保存
二、高壓滅菌型的配制
1、將1升的高壓滅菌型干粉在900ml細胞培養(yǎng)級純凈水中溶解
2、將溶液pH調(diào)至4.0并將溶液體積調(diào)至960ml
3、在121℃,15psi高壓消毒5分鐘
4、將培養(yǎng)基迅速取出,避免過久加熱引起成份分解或液體蒸發(fā)減少
5、待培養(yǎng)基冷卻至室溫后,無菌操作加入29.3ml的無菌7.5%碳酸氫鈉溶液,及10ml的無菌200mML-谷氨酰胺
6、如有必要,用無菌的1N鹽酸或1N氫氧化鈉調(diào)整pH
7、將培養(yǎng)基在2~8℃避光保存