GelRed核酸染料是一種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定性于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國環(huán)保局安全認(rèn)定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會造成任何環(huán)境污染。其特點有:
1)高靈敏度:GelRed 和 GelGreen 是目前市場中zui靈敏的凝膠核酸染料之一;
2)穩(wěn)定性*:可以使用微波爐加熱,可以在室溫下保存;
3)廣泛的適應(yīng)性:適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色;
4)更安全:艾姆斯氏試驗結(jié)果表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠(EB);
5)染色過程簡單:與EB一樣,在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解;而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗;
6)對 DNA 和 RNA 的遷移影響小:對核酸遷移的影響小于 SYBR Green I?;
7)與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容:使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時,GelRed 可以的替代EB;使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時,GelGreen 足以替代任意一種 SYB染料。但該染料會使小片段DNA遷移慢一些(與EB相比)。
GelRed核酸染料的貯存:室溫避光保存一年;4℃避光保存三年。
GelRed核酸染料的使用方法:
一、GelRed預(yù)染方法
1.將GelRed試劑按1:10000溶于瓊脂糖凝膠溶液中,充分混勻。(例如:將5ul GelRed 試劑加入到50ml 凝膠溶液中)。注:由于GelRed 具有出色的熱穩(wěn)定性,可將試劑直接加入高溫的凝膠溶液中,而不用等凝膠溶液冷卻后再加入。
2.澆制凝膠并使其凝固后上樣電泳。注意:使用這種預(yù)先加入染色劑的瓊脂糖凝膠,每次不易加入太多的 DNA 樣品,否則容易造成飽和現(xiàn)象,可以做多個不同濃度的 DNA Marker,以確定* DNA 上樣量。
3.紫外下觀察結(jié)果。注:如果始終出現(xiàn)拖尾或是條帶無法分離的現(xiàn)象,您可以使用后染法對DNA染色,以確認(rèn)問題是否與染色劑有關(guān)。如果使用后染法問題依舊存在,則說明問題與染色劑無關(guān),請嘗試減少核酸的上樣量后進(jìn)行電泳。
二、GelRed后染方法
1.用H2O將GelRed稀釋約3300倍到0.1M Nacl中,制成3X染色溶液。(例如:將15 μl GelRed和5ml的1M NaCl加入到45ml H2O中)。注:GelRed 1X染色溶液同樣可用于后染,但其靈敏度要低于3X染色溶液。
2.將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3X染色溶液浸沒凝膠。
3.在室溫下輕輕地?fù)u動凝膠板,*的染膠時間為30 分鐘,這取決于凝膠板的厚度、瓊脂糖或聚丙烯酰胺的濃度和 DNA 的長短。凝膠越厚或瓊脂糖的濃度越高,染色所需要的時間就越長。注:染色溶液至少可重復(fù)使用2-3次。如果不是立即再用的話,建議將用過的染色溶液冷藏保存。
4.紫外下觀察結(jié)果。
注意:GelRed核酸染料使用前應(yīng)在室溫下*融化混勻后使用。
了解以上內(nèi)容,對我們使用GelRed核酸染料很有幫助,讓我們使用GelRed核酸染料更加得心應(yīng)手。